ऑस्टियोआर्थराइटिस (ओए) दीर्घकालिक पुरानी अपक्षयी हड्डी संयुक्त बीमारियों में से एक है जो 65 वर्ष से अधिक उम्र की आबादी को प्रभावित करती है।
1]। आम तौर पर, ओए रोगियों में क्षतिग्रस्त उपास्थि, सूजन वाले सिनोवियम और घिसे हुए कोन्ड्रोसाइट्स का निदान किया जाता है, जो दर्द और शारीरिक परेशानी को ट्रिगर करते हैं [
2] गठिया का दर्द मुख्य रूप से सूजन के कारण जोड़ों में उपास्थि के क्षरण के कारण होता है, और जब उपास्थि गंभीर रूप से क्षतिग्रस्त हो जाती है तो हड्डियां एक-दूसरे से टकरा सकती हैं जिससे असहनीय दर्द और शारीरिक कष्ट होता है।
3]। जोड़ों में दर्द, सूजन और अकड़न जैसे लक्षणों में सूजन पैदा करने वाले मध्यस्थों की भूमिका अच्छी तरह से प्रमाणित है। ओए रोगियों में, सूजन पैदा करने वाले साइटोकिन्स, जो उपास्थि और उपकोंड्रल अस्थि के क्षरण का कारण बनते हैं, श्लेष द्रव में पाए जाते हैं।
4]। ओए रोगियों की आम तौर पर दो प्रमुख शिकायतें दर्द और सिनोवियल सूजन हैं। इसलिए वर्तमान ओए उपचारों का प्राथमिक लक्ष्य दर्द और सूजन को कम करना है। [
5]। हालांकि गैर-स्टेरायडल और स्टेरायडल दवाओं सहित उपलब्ध ओए उपचारों ने दर्द और सूजन को कम करने में प्रभावकारिता साबित की है, लेकिन इन दवाओं के दीर्घकालिक उपयोग से हृदय, जठरांत्र और गुर्दे की शिथिलता जैसे गंभीर स्वास्थ्य परिणाम होते हैं।
6] इस प्रकार, ऑस्टियोआर्थराइटिस के उपचार के लिए कम दुष्प्रभावों वाली अधिक प्रभावी दवा विकसित की जानी चाहिए।
प्राकृतिक स्वास्थ्य उत्पाद सुरक्षित और आसानी से उपलब्ध होने के कारण तेजी से लोकप्रिय हो रहे हैं।
7] पारंपरिक कोरियाई दवाओं ने गठिया सहित कई सूजन संबंधी बीमारियों के खिलाफ प्रभावकारिता साबित की है।
8] ऑकलैंडिया लप्पा डी.सी. अपने औषधीय गुणों के लिए जाना जाता है, जैसे दर्द से राहत और पेट को आराम पहुंचाने के लिए क्यूई के परिसंचरण को बढ़ाना, और पारंपरिक रूप से प्राकृतिक एनाल्जेसिक के रूप में इसका उपयोग किया जाता है।
9]। पिछली रिपोर्टों से पता चलता है कि ए. लप्पा में सूजनरोधी गुण होते हैं।
10,
11], दर्दनाशक [
12], कैंसर रोधी [
13], और गैस्ट्रोप्रोटेक्टिव [
14] प्रभाव। ए. लप्पा की विभिन्न जैविक गतिविधियाँ इसके प्रमुख सक्रिय यौगिकों के कारण होती हैं: कॉस्टुनोलाइड, डीहाइड्रोकॉस्टस लैक्टोन, डायहाइड्रोकॉस्टुनोलाइड, कॉस्टसलैक्टोन, α-कॉस्टोल, सॉसुरिया लैक्टोन और कॉस्टसलैक्टोन [
15]। पहले के अध्ययनों का दावा है कि कॉस्टुनोलाइड ने लिपोपॉलीसेकेराइड (एलपीएस) में सूजन-रोधी गुण दिखाए, जिसने एनएफ-केबी और हीट शॉक प्रोटीन मार्ग के नियमन के माध्यम से मैक्रोफेज को प्रेरित किया।
16,
17]। हालाँकि, किसी भी अध्ययन ने ओए के उपचार के लिए ए. लप्पा की संभावित गतिविधियों की जाँच नहीं की है। वर्तमान शोध में (मोनोसोडियम-आयोडोएसीटेट) एमआईए और एसिटिक एसिड-प्रेरित कृंतक मॉडल का उपयोग करके ओए के विरुद्ध ए. लप्पा के चिकित्सीय प्रभावों की जाँच की गई है।
मोनोसोडियम-आयोडोएसीटेट (एमआईए) का उपयोग जानवरों में दर्द व्यवहार और ओए की पैथोफिजियोलॉजिकल विशेषताओं को उत्पन्न करने के लिए किया जाता है।
18,
19,
20]। जब घुटने के जोड़ों में इंजेक्ट किया जाता है, तो एमआईए उपास्थि कोशिकाओं के चयापचय को बिगाड़ देता है और सूजन और सूजन संबंधी लक्षण उत्पन्न करता है, जैसे उपास्थि और उपचन्द्रीय हड्डी का क्षरण, जो ओए के प्रमुख लक्षण हैं।
18] एसिटिक एसिड से प्रेरित ऐंठन प्रतिक्रिया को व्यापक रूप से जानवरों में परिधीय दर्द के अनुकरण के रूप में माना जाता है, जहां सूजन संबंधी दर्द को मात्रात्मक रूप से मापा जा सकता है [
19]। माउस मैक्रोफेज कोशिका रेखा, RAW264.7, का उपयोग सूजन के प्रति कोशिकीय प्रतिक्रियाओं के अध्ययन के लिए व्यापक रूप से किया जाता है। LPS द्वारा सक्रिय होने पर, RAW264 मैक्रोफेज सूजन संबंधी मार्गों को सक्रिय करते हैं और कई सूजन संबंधी मध्यस्थों, जैसे TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, और IL-6 का स्राव करते हैं।
20] इस अध्ययन में एमआईए पशु मॉडल, एसिटिक एसिड-प्रेरित पशु मॉडल और एलपीएस-सक्रिय RAW264.7 कोशिकाओं में ओए के खिलाफ ए. लप्पा के एंटी-नोसिसेप्टिव और एंटी-इंफ्लेमेटरी प्रभावों का मूल्यांकन किया गया है।
2। सामग्री और विधि
2.1. पादप सामग्री
प्रयोग में प्रयुक्त ए. लप्पा डीसी की सूखी जड़ एपुलिप फार्मास्युटिकल कंपनी लिमिटेड, सियोल, कोरिया से प्राप्त की गई थी। इसकी पहचान गाचोन विश्वविद्यालय के कोरियन मेडिसिन विभाग के हर्बल फार्माकोलॉजी विभाग के प्रो. डोंगहुन ली ने की और वाउचर नमूना संख्या 18060301 जमा की गई।
2.2. ए. लप्पा अर्क का एचपीएलसी विश्लेषण
ए. लप्पा को एक रिफ्लक्स उपकरण (आसुत जल, 100°C पर 3 घंटे) का उपयोग करके निकाला गया। निकाले गए घोल को एक निम्न-दाब वाष्पक का उपयोग करके फ़िल्टर और संघनित किया गया। -80°C पर फ्रीज-ड्राइंग के बाद ए. लप्पा के अर्क की उपज 44.69% थी। ए. लप्पा का क्रोमैटोग्राफिक विश्लेषण एक 1260 इन्फिनिटीⅡ HPLC-सिस्टम (एजिलेंट, पाल ऑल्टो, कैलिफ़ोर्निया, यूएसए) का उपयोग करके जुड़े HPLC के साथ किया गया। वर्ण पृथक्करण के लिए, 35°C पर एक्लिप्सXDB C18 कॉलम (4.6 × 250 मिमी, 5 µm, एजिलेंट) का उपयोग किया गया। नमूने के कुल 100 मिलीग्राम को 10 मिलीलीटर 50% मेथनॉल में तनु किया गया और 10 मिनट के लिए ध्वनिकृत किया गया। नमूनों को 0.45 माइक्रोमीटर के सिरिंज फ़िल्टर (वाटर्स कॉर्पोरेशन, मिलफोर्ड, मैसाचुसेट्स, यूएसए) से फ़िल्टर किया गया। गतिशील प्रावस्था संघटन 0.1% फॉस्फोरिक अम्ल (A) और एसीटोनिट्राइल (B) था और स्तंभ का निक्षालन निम्न प्रकार से किया गया: 0–60 मिनट, 0%; 60–65 मिनट, 100%; 65–67 मिनट, 100%; 67–72 मिनट, 0% विलायक B, 1.0 मिली/मिनट की प्रवाह दर के साथ। 10 μL की इंजेक्शन मात्रा का उपयोग करके 210 नैनोमीटर पर बहिःस्राव का प्रेक्षण किया गया। विश्लेषण तीन प्रतियों में किया गया।
2.3. पशु आवास और प्रबंधन
5 सप्ताह की आयु के नर स्प्रैग-डॉली (एसडी) चूहों और 6 सप्ताह की आयु के नर आईसीआर चूहों को समताको बायो कोरिया (ग्योंगि-डो, कोरिया) से खरीदा गया था। जानवरों को स्थिर तापमान (22 ± 2 °C) और आर्द्रता (55 ± 10%) और 12/12 घंटे के प्रकाश/अंधेरे चक्र वाले कमरे में रखा गया था। प्रयोग शुरू होने से पहले जानवरों को एक सप्ताह से अधिक समय तक स्थिति से परिचित कराया गया था। जानवरों को चारा और पानी की भरपूर आपूर्ति की गई थी। गाचोन विश्वविद्यालय (GIACUC-R2019003) में पशु देखभाल और संचालन के वर्तमान नैतिक नियमों का सभी पशु प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं में सख्ती से पालन किया गया था। अध्ययन को अन्वेषक-अंधा और समानांतर परीक्षण के लिए डिज़ाइन किया गया था।
2.4. एमआईए इंजेक्शन और उपचार
चूहों को यादृच्छिक रूप से चार समूहों में विभाजित किया गया, अर्थात् शैम, नियंत्रण, इंडोमेथेसिन और ए. लप्पा। 2% आइसोफ्लोरेन O2 मिश्रण से निश्चेतित करके, चूहों को प्रायोगिक ओए प्राप्त करने के लिए घुटने के जोड़ों में 50 μL MIA (40 mg/m2; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, मिसौरी, अमेरिका) का इंजेक्शन दिया गया। उपचार निम्नानुसार किए गए: नियंत्रण और शैम समूहों को केवल AIN-93G मूल आहार दिया गया। केवल, इंडोमेथेसिन समूह को AIN-93G आहार में शामिल इंडोमेथेसिन (3 mg/kg) दिया गया और ए. लप्पा 300 mg/kg समूह को AIN-93G आहार में ए. लप्पा (300 mg/kg) की खुराक दी गई। ओए प्रेरण के दिन से 24 दिनों तक प्रतिदिन 15-17 ग्राम प्रति 190-210 ग्राम शरीर भार की दर से उपचार जारी रखा गया।
2.5. भार वहन माप
ओए प्रेरण के बाद, चूहों के पिछले अंगों की भार वहन क्षमता का मापन इनकैपेसिटेंस-मीटरटेस्टर600 (आईआईटीसी लाइफ साइंस, वुडलैंड हिल्स, कैलिफ़ोर्निया, यूएसए) द्वारा निर्धारित समय पर किया गया। पिछले अंगों पर भार वितरण की गणना इस प्रकार की गई: भार वहन क्षमता (%)