मोमबत्ती और साबुन बनाने के लिए शुद्ध सैपोश्निकोविया डिवैरिकाटा तेल, थोक में उपलब्ध, रीड बर्नर डिफ्यूज़र के लिए नया एसेंशियल ऑयल।

संक्षिप्त वर्णन:

 

2.1. एसडीई की तैयारी

एसडी के प्रकंदों को हनहर्ब कंपनी (गुरी, कोरिया) से सूखी जड़ी बूटी के रूप में खरीदा गया था। पौधे की सामग्री का वर्गीकरण कोरिया इंस्टीट्यूट ऑफ ओरिएंटल मेडिसिन (केआईओएम) के डॉ. गो-या चोई द्वारा सत्यापित किया गया था। एक वाउचर नमूना (संख्या 2014 एसडीई-6) कोरियाई मानक हर्बल संसाधन हर्बेरियम में जमा किया गया था। एसडी के सूखे प्रकंदों (320 ग्राम) को 70% इथेनॉल के साथ दो बार (2 घंटे के रिफ्लक्स के साथ) निकाला गया और फिर कम दबाव में अर्क को गाढ़ा किया गया। काढ़े को छानकर, फ्रीज-ड्राय करके 4°C पर संग्रहित किया गया। कच्चे प्रारंभिक पदार्थों से सूखे अर्क की उपज 48.13% (वजन/वजन) थी।

 

2.2. मात्रात्मक उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) विश्लेषण

क्रोमैटोग्राफिक विश्लेषण एचपीएलसी प्रणाली (वाटर्स कंपनी, मिलफोर्ड, एमए, यूएसए) और एक फोटोडायोड ऐरे डिटेक्टर का उपयोग करके किया गया था। एसडीई के एचपीएलसी विश्लेषण के लिए, प्राथमिक-O-ग्लूकोसिलसिमिफुगिन मानक कोरिया प्रमोशन इंस्टीट्यूट फॉर ट्रेडिशनल मेडिसिन इंडस्ट्री (ग्योंगसान, कोरिया) से खरीदा गया था, औरसेक-ओ-ग्लूकोसिलहैमौडोल और 4′-O-β-डी-ग्लूकोसिल-5-O-मिथाइलविसैमिनोल को हमारी प्रयोगशाला में पृथक किया गया और मुख्य रूप से एनएमआर और एमएस द्वारा वर्णक्रमीय विश्लेषणों के माध्यम से पहचाना गया।

एसडीई नमूनों (0.1 मिलीग्राम) को 70% इथेनॉल (10 मिलीलीटर) में घोला गया। क्रोमैटोग्राफिक पृथक्करण एक्ससेलेक्ट एचएसएस टी3 सी18 कॉलम (4.6 × 250 मिमी, 5) का उपयोग करके किया गया।μएम, वाटर्स कंपनी, मिलफोर्ड, एमए, यूएसए)। मोबाइल चरण में एसीटोनिट्राइल (ए) और पानी में 0.1% एसिटिक एसिड (बी) शामिल थे, जिनकी प्रवाह दर 1.0 एमएल/मिनट थी। एक बहु-चरणीय ग्रेडिएंट प्रोग्राम का उपयोग इस प्रकार किया गया: 5% ए (0 मिनट), 5–20% ए (0–10 मिनट), 20% ए (10–23 मिनट), और 20–65% ए (23–40 मिनट)। पता लगाने की तरंगदैर्ध्य को 210–400 एनएम पर स्कैन किया गया और 254 एनएम पर रिकॉर्ड किया गया। इंजेक्शन की मात्रा 10.0 थी।μएल. तीन क्रोमोन के निर्धारण के लिए मानक विलयन 7.781 मिलीग्राम/एमएल (प्रारंभिक) की अंतिम सांद्रता पर तैयार किए गए थे।O-ग्लूकोसिलसिमिफुगिन), 31.125 मिलीग्राम/एमएल (4′-O-β-डी-ग्लूकोसिल-5-O-मिथाइलविसेमिनोल), और 31.125 मिलीग्राम/एमएल (सेक-ओ-ग्लूकोसिलहैमौडोल) को मेथनॉल में घोलकर 4°C पर रखा गया।

2.3. सूजनरोधी गतिविधि का मूल्यांकनकृत्रिम परिवेशीय

2.3.1. कोशिका संवर्धन और नमूना उपचार

RAW 264.7 कोशिकाएं अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (ATCC, Manassas, VA, USA) से प्राप्त की गईं और उन्हें 1% एंटीबायोटिक्स और 5.5% FBS युक्त DMEM माध्यम में विकसित किया गया। कोशिकाओं को 37°C पर 5% CO2 के आर्द्र वातावरण में रखा गया। कोशिकाओं को उत्तेजित करने के लिए, माध्यम को ताजे DMEM माध्यम से बदल दिया गया और उसमें लिपोपॉलीसेकेराइड (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) मिलाया गया।μएसडीई (200 या 400) की उपस्थिति या अनुपस्थिति में जी/एमएल मिलाया गया।μअतिरिक्त 24 घंटों के लिए (ग्राम/एमएल)।

2.3.2. नाइट्रिक ऑक्साइड (NO), प्रोस्टाग्लैंडिन E2 (PGE2), ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर का निर्धारण-α(टीएनएफ-α), और इंटरल्यूकिन-6 (IL-6) उत्पादन

कोशिकाओं को एसडीई से उपचारित किया गया और 24 घंटे के लिए एलपीएस से उत्तेजित किया गया। पिछले अध्ययन के अनुसार ग्रीस अभिकर्मक का उपयोग करके नाइट्राइट को मापकर एनओ उत्पादन का विश्लेषण किया गया।12सूजन पैदा करने वाले साइटोकाइन पीजीई2, टीएनएफ- का स्रावαIL-6 का निर्धारण निर्माता के निर्देशों के अनुसार ELISA किट (R&D सिस्टम्स) का उपयोग करके किया गया था। NO और साइटोकाइन उत्पादन पर SDE के प्रभावों का निर्धारण वॉलैक एनविजन का उपयोग करके 540 nm या 450 nm पर किया गया था।™माइक्रोप्लेट रीडर (पेर्किनएल्मर)।

2.4. ऑस्टियोआर्थराइटिस रोधी गतिविधि का मूल्यांकनइन विवो

2.4.1. जानवर

सैमटाको इंक. (ओसान, कोरिया) से 7 सप्ताह के नर स्प्रैग-डॉली चूहे खरीदे गए और उन्हें 12 घंटे के प्रकाश/अंधेरे चक्र के साथ नियंत्रित परिस्थितियों में रखा गया।डिग्री सेल्सियस औरप्रतिशत आर्द्रता। चूहों को प्रयोगशाला का आहार और पानी दिया गया।यथेच्छसभी प्रायोगिक प्रक्रियाएं राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) के दिशानिर्देशों के अनुपालन में की गईं और दाएजॉन विश्वविद्यालय (दाएजॉन, दक्षिण कोरिया) की पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित की गईं।

2.4.2. चूहों में एमआईए द्वारा ओए का प्रेरण

अध्ययन शुरू होने से पहले जानवरों को यादृच्छिक रूप से चुना गया और उन्हें उपचार समूहों में विभाजित किया गया।प्रति समूह)। एमआईए घोल (3 मिलीग्राम/50μकेटामाइन और ज़ाइलाज़ीन के मिश्रण से प्रेरित एनेस्थीसिया के तहत, चूहों को दाहिने घुटने के इंट्राआर्टिकुलर स्पेस में सीधे 0.9% खारे घोल (L) का इंजेक्शन लगाया गया। चूहों को यादृच्छिक रूप से चार समूहों में विभाजित किया गया: (1) खारे घोल वाला समूह जिसमें MIA इंजेक्शन नहीं लगाया गया, (2) MIA समूह जिसमें MIA इंजेक्शन लगाया गया, (3) SDE-उपचारित समूह (200 मिलीग्राम/किग्रा) जिसमें MIA इंजेक्शन लगाया गया, और (4) इंडोमेथेसिन (IM)-उपचारित समूह (2 मिलीग्राम/किग्रा) जिसमें MIA इंजेक्शन लगाया गया। चूहों को MIA इंजेक्शन से 1 सप्ताह पहले से लेकर 4 सप्ताह तक SDE और IM मौखिक रूप से दिए गए। इस अध्ययन में प्रयुक्त SDE और IM की खुराक पिछले अध्ययनों में प्रयुक्त खुराकों पर आधारित थी।10,13,14].

2.4.3. पश्चपाद भार-वहन वितरण का मापन

ऑस्टियोआर्थराइटिस (OA) प्रेरित होने के बाद, पिछले पंजों की भार वहन क्षमता में मूल संतुलन बिगड़ गया। भार वहन सहनशीलता में परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए एक अक्षमता परीक्षक (लिंटन इंस्ट्रूमेंटेशन, नॉरफ़ॉक, यूके) का उपयोग किया गया। चूहों को सावधानीपूर्वक मापन कक्ष में रखा गया। पिछले पैर द्वारा लगाए गए भार वहन बल का 3 सेकंड की अवधि में औसत निकाला गया। भार वितरण अनुपात की गणना निम्नलिखित समीकरण द्वारा की गई: [दाएँ पिछले पैर पर भार / (दाएँ पिछले पैर पर भार + बाएँ पिछले पैर पर भार)] × 10015].

2.4.4. सीरम साइटोकाइन स्तरों का मापन

रक्त के नमूनों को 4°C पर 10 मिनट के लिए 1,500 g पर सेंट्रीफ्यूज किया गया; फिर सीरम को एकत्रित करके उपयोग होने तक -70°C पर संग्रहित किया गया। IL-1 के स्तरβ, आईएल-6, टीएनएफ-αसीरम में पीजीई2 और इसके स्तर को आर एंड डी सिस्टम्स (मिनियापोलिस, एमएन, यूएसए) की एलिसा किट का उपयोग करके निर्माता के निर्देशों के अनुसार मापा गया।

2.4.5. वास्तविक समय मात्रात्मक आरटी-पीसीआर विश्लेषण

घुटने के जोड़ के ऊतक से कुल RNA को TRI रिएजेंट® (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) का उपयोग करके निकाला गया, फिर इसे cDNA में रिवर्स-ट्रांसक्राइब किया गया और SYBR ग्रीन (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, ग्रैंड आइलैंड, एनवाई, यूएसए) के साथ TM वन स्टेप RT PCR किट का उपयोग करके PCR द्वारा प्रवर्धित किया गया। एप्लाइड बायोसिस्टम्स 7500 रियल-टाइम PCR सिस्टम (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, ग्रैंड आइलैंड, एनवाई, यूएसए) का उपयोग करके रियल-टाइम क्वांटिटेटिव PCR किया गया। प्राइमर अनुक्रम और प्रोब अनुक्रम तालिका में दिखाए गए हैं।1नमूना सीडीएनए के अंशों और समान मात्रा में जीएपीडीएच सीडीएनए को निर्माता के निर्देशों (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर, कैलिफोर्निया, यूएसए) के अनुसार डीएनए पॉलीमरेज़ युक्त टैकमैन® यूनिवर्सल पीसीआर मास्टर मिश्रण के साथ प्रवर्धित किया गया। पीसीआर की शर्तें 50°C पर 2 मिनट, 94°C पर 10 मिनट, 95°C पर 15 सेकंड और 60°C पर 1 मिनट, कुल 40 चक्र थीं। निर्माता के निर्देशों के अनुसार, तुलनात्मक सीटी (प्रवर्धन प्लॉट और थ्रेशोल्ड के बीच क्रॉस-पॉइंट पर थ्रेशोल्ड चक्र संख्या) विधि का उपयोग करके लक्ष्य जीन की सांद्रता निर्धारित की गई।

एफओबी मूल्य:0.5 अमेरिकी डॉलर - 9,999 अमेरिकी डॉलर / प्रति पीस

न्यूनतम आर्डर राशि:100 पीस

आपूर्ति की योग्यता:प्रति माह 10000 पीस